蔡司光学课 | 聊聊石蜡切片那些事儿

Release time: 2023-05-25


组织切片制备技术发展至今已有上百年历史,作为组织学及发育生物学研究最重要的基本制样技术,在整个生命科学的发展中都扮演重要角色。今天,蔡司君就来带大家一起了解一下虽然历史悠久,但是至今都使用最多,应用最广的石蜡切片。

作为最早使用的包埋剂之一,石蜡能够长久保存且对材料提供良好的支撑,有效的避免切片形变,同时,由于其质地柔软粘连,能够以蜡带的形式轻松制作连续切片,这是其它切片技术难以做到的。

石蜡切片的制备相对繁琐,包括固定,脱水,包埋,切片,染色,封片,我们详细展开来看:

固定

活体组织一旦停止血液循环和物质代谢就会慢慢腐败自溶。因此,在切下组织块后,需将其快速置于预先配制好的固定液中以保存其组织形态。FAA是常用的混合固定液,由70%酒精,冰醋酸,福尔马林以90:5:5混合配制而成,收缩少,穿透快,24小时内就能完成固定。

脱水

材料固定好后就需要脱水,脱水的目的是为了能将组织中的水置换为能与石蜡互溶的有机溶剂,这个过程需要温和渐进,一般采用先75%-100%乙醇梯度后再20%-100%二甲苯梯度脱水的方法以确保材料不发生强烈形变。

包埋

向已经脱水透明好的样品中少量多次加入碎蜡,使其在37℃下形成完全饱和的石蜡-二甲苯溶液,再将样品置于60℃液态的50%-100%石蜡中以确保石蜡充分渗透样品,随后放入包埋盒中以不高于60℃的石蜡包埋。

▲ 石蜡包埋

切片

在开始切片前,需提前准备好涂有蛋清甘油或多聚赖氨酸的黏附载玻片。将包埋好的蜡块置于切片机上,以2-10μm的厚度切片。切成的蜡带放在滴有水的玻片上,蜡带会由水的表面张力而均匀展开,也可以使用水槽捞片来让切片更加平整。吸去多余的水后,置于烘片机上37℃烘干。

▲ 切片&捞片

染色封片

石蜡会妨碍染料进入组织,需要用二甲苯浸泡将蜡脱掉,再100%-0%梯度乙醇复水。之后按照不同染料的染色方法,对切片进行染色。 

番红-固绿染色                                                                                       Masson三色法

HE染色                                                                                       天狼星红染色

▲ HE染色,Masson三色法等复染色法都是病理学研究中的常用方法,利用不同结构对染料亲和性的不同对组织进行差异化染色。而像天狼星红这样的染料则是能够增强胶原纤维的双折射性,可使其在偏光观察下呈现不同的状态。

染色完成后需再次进行30%乙醇-二甲苯梯度脱水,最后使用中性树胶封片,完全固化后就能观察拍照了。当然也可以使用商业化的封片剂,如果需要油镜观察则应尽量选择折射率在1.5左右的封片剂。

观察与拍摄

当我们完成切片的制备之后,应该尽快完成观察和成像,以防止放置时间过长导致切片出现干裂,开胶等问题,影响我们的实验结果。

根据染料不同,我们可以选择明场,偏光或者荧光的观察方式进行拍摄,蔡司为切片数字化提供不同解决方案,比如研究级的蔡司Axio Imager系列正置显微镜就是采集切片数据的上佳之选。

✓ 高分辨复消色差的物镜配合无限远光学校正系统,力求最大限度校正像差;

✓ 蔡司特有镀膜技术为荧光滤片和镜头组提供接近100%的透光率,能降低光损失,提供出色的图像对比度。

当然,如果我们需要对大量切片进行数据采集时,一台蔡司Axioscan 7全自动玻片扫描系统就能够解放我们的双手。

✓ 搭载明场,偏光,荧光三种成像模式,无论是何种染色方式的切片都能够完美兼容;

✓ 整机全封闭机体最大程度确保了光路的稳定性;

✓ 其100片的单次上样容量,快速荧光滤片转轮提供了快速高通量的扫描体验;

✓ 全新设计的自动校准光路以及高端Peltier冷却相机确保了Axioscan 7始终清晰锐利的图像质量和理想的色彩还原,是切片数字化的不二之选。

以上就是常规石蜡切片的制备方法,除常规化学染色外,该技术也常常用于制备免疫荧光切片,后续我们也会为您带来详细的介绍。

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